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植物脱落酸(ABA)酶联免疫分析ELISA试剂盒说明书

点击:次 日期:2017-1-1

植物脱落酸(ABA)酶联免疫分析ELISA试剂盒说明书

植物脱落酸(ABA)酶联免疫分析(ELISA)

试剂盒使用说明书
本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定植物组织,细胞及其它相干样本中植物脱落酸(ABA)含量。
实验原理:
本试剂盒利用双抗体夹心法测定标本中植物脱落酸(ABA)水平。用纯化的植物脱落酸(ABA)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中顺次加入植物脱落酸(ABA)抗原,再与HRP标记的ABA抗体结合,构成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过完全洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终究的黄色。色彩的深浅和样品中的植物脱落酸(ABA)呈正相干。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中植物脱落酸(ABA)抗原浓度。

试剂盒组成:

试剂盒组成

48孔配置

96孔配置

保存

说明书

1份

1份


封板膜

2片(48)

2片(96)


蝶阀t-align:center">密封袋
<>试验机p style="text-align:center">1个

1个


酶标包被板

1×48

1×96

2⑻℃保存

标准品:225μg/L

0.5ml×1瓶

0.5ml×1瓶

2⑻℃保存

标准品稀释液

1.5ml×1瓶

1.5ml×1瓶

2⑻℃保存

酶标试剂

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2⑻℃保存

样品稀释液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2⑻℃保存

显色剂A液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2⑻℃保存

显色剂B液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2⑻℃保存

终止液

3ml×1瓶

疲劳试验机制动器ter">6ml×1瓶

2⑻℃保存

浓缩洗涤液
(20ml×20倍)×1瓶

(20ml×30倍)×1瓶

2⑻℃保存
标本要求:

1.标本收集后尽早进行提取,提取按相干文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行实验,可将标本放于⑵0℃保存,但应避免反复冻融

2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤:

    标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第1、第2孔中分别加标准品100μl,然后在第1、第2孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第1孔、第2孔中各取100μl分别加到第3孔和第4孔,再在第3、第4孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第3孔和第4孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第5、第6孔中,再在第5、第6孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第5、第6孔中各取50μl分别加到第7、第8孔中,再在第7、第8孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第7、第8孔中分别取50μl加到第9、第10孔中,再在第9第10孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第9第10孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为150μg/L,100μg/L,50μg/L,25μg/L,12.5μg/L)。加样:分别设空白孔(空白对比孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终究稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽可能不触及孔壁,轻轻晃动混匀。温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。洗高温试验箱加工涤:谨慎揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。温育:操作同3。洗涤:操作同5。显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。测定:以空白空调零,450nm波长依序丈量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟之内进行。
    注意事项:
      试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15⑶0分钟后方可以使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。各步加样均应使用加样器,并常常校订其准确性,以免实验误差。1次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物资含量太高(样本OD值大于标准品孔第1孔的OD值),请先用样品稀释液稀释1定倍数(n莱州硬度计倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。封板膜只限1次性使用,以免交叉污染。底物请避光保存。严格依照说明书的操作进行,实验结果判定必须以酶标仪读数为准.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按沾染物处理。本试剂不同批号组分不得混用。10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。
      植物脱落酸(ABA)酶联免疫分析ELISA试剂盒说明书
      计算:
      以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,
      在座标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD
      值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释
      倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标
      准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值
      代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释
      倍数,即为样品的实际浓度。

      (此图仅供参考)

      试剂盒性能:
      1.样品线性回归与预期浓度相干系数R值为0.92以上。
      2.批内与批见应分别小于9%和15%

      检测范围:
      10μg/L⑶00μg/L
      保存条件及有效期:
      1.试剂盒保存:;2⑻℃。
      2.有效期:6个月